お知らせ
リアルタイムPCRを応用した角膜感染症の迅速診断 【1時間程度でウイルスDNAの検出が可能】
角膜感染症の透明治癒のためには，いかに短時間で診断を下し，治療を開始できるかが重要である。真菌，細菌，原虫（アカントアメーバ）の場合，病原体が光学顕微鏡で判別できる大きさであるので，迅速診断は一般的にはサンプルの塗抹，染色，検鏡で行われる。しかしウイルスの場合，光学顕微鏡で判別できる大きさではないので，従来は角膜の所見から診察医の経験により判断されてきた。
Kary Mullisが考案したポリメラーゼ連鎖反応（polymerase chain reaction：PCR）法は，分子生物学的研究にとどまらず，臨床検査法としても発展を続け，機材の高性能化と検出手法の改良により，簡便，迅速かつ，感度，特異度ともに高い検査方法となった。ウイルスDNA特異的プライマーを遺伝子の上流と下流にデザインし，PCR産物の中間にプローブを設定することで特異度が増し，PCR産物に接着したプローブから離れて蛍光を発する蛍光物質の蛍光量が閾値に達するPCRのサイクル数から，ウイルスDNAを1時間程度で検出することができる。このとき，PCR増幅配列を含む既知のコピー数の環状DNA（プラスミド）を準備しておくと，サンプル当たりのウイルスDNAのコピー数を算出してくれる定量リアルタイムPCR法が可能となる。
リアルタイムPCR法は，理論的には1コピーでも検出可能である。健常者でもウイルスDNAが検出されることがあり，ウイルスDNAのコピー数の定量が感染症の有無を判断し，治療効果を判定する上で重要な情報となる。
【解説】
林 康人 愛媛大学眼科講師
